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小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽ELISA試劑盒說明書

更新時間:2024-07-12    點擊次數(shù):608

  小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽ELISA試劑盒說明書

  一、產(chǎn)品概述

  小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽(PINP)ELISA試劑盒是用于定量檢測小鼠血清、血漿或其他相關生物樣品中小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽濃度的體外診斷試劑。本試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理,具有高靈敏度、高特異性和操作簡便等特點,適用于科研實驗、臨床診斷以及藥物研發(fā)等領域。

  二、產(chǎn)品組成

  1. 預包被PINP抗體的96孔板

  2. PINP標準品(凍干粉)

  3. PINP檢測抗體

  4. 辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗

  5. 顯色液A(TMB)

  6. 顯色液B(H?O?)

  7. 終止液(2N H?SO?)

  8. 濃縮洗滌液(20倍)

  9. 樣本稀釋液

  10. 酶標儀用覆蓋膜

  11. 試劑盒說明書

  三、保存與運輸

  1. 試劑盒應儲存于2-8℃避光環(huán)境中,有效期為XX個月。

  2. 標準品、檢測抗體、二抗和酶標板切勿反復凍融。

  3. 運輸過程中應保持試劑盒低溫狀態(tài),避免陽光直射和劇烈震動。

  四、檢測原理

  本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測小鼠血清或血漿中的PINP。將PINP抗體包被于96孔板上,加入待測樣本和標準品,樣本中的PINP與包被抗體結合,再加入PINP檢測抗體,形成抗體-PINP-抗體復合物,最后加入HRP標記的二抗,通過顯色反應,利用酶標儀測定OD值,根據(jù)標準曲線計算待測樣本中PINP的濃度。

  五、操作步驟

  1. 準備工作:提前30分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。用蒸餾水或去離子水將洗滌液稀釋至工作濃度。

  2. 標準品制備:用樣本稀釋液將PINP標準品稀釋成不同濃度的標準品溶液。

  3. 加樣:分別將不同濃度的標準品溶液和待測樣本加入孔板中,每孔100μL,設置空白對照孔,輕搖混勻。

  4. 溫育:用封板膜封板后,置37℃溫育30分鐘。

  5. 洗滌:揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μL,空白孔除外。

  7. 溫育:再次用封板膜封板后,置37℃溫育30分鐘。

  8. 洗滌:重復步驟5的洗滌操作。

  9. 顯色:每孔先加入顯色液A 50μL,再加入顯色液B 50μL,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。

  10. 終止:每孔加終止液50μL,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

  11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

  六、結果計算與判斷

  1. 根據(jù)標準品OD值和對應濃度繪制標準曲線,計算出標準曲線的回歸方程。

  2. 將待測樣本的OD值代入回歸方程,計算出待測樣本中PINP的濃度。

  3. 結果判斷:根據(jù)正常參考值范圍,判斷待測樣本中小鼠PINP的水平是否正常。

  七、注意事項

  1. 嚴格按照操作步驟進行,避免交叉污染。

  2. 洗滌過程中要充分拍干孔板,避免殘留洗滌液影響實驗結果。

  3. 顯色反應時間應嚴格控制,避免顯色時間過長或過短導致結果不準確。

  4. 若樣本濃度超出線性范圍,需適當稀釋后重新測定。

  5. 試劑盒為一次性使用產(chǎn)品,不可重復使用。

  八、臨床意義

  小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽(PINP)是骨形成過程中的重要標志物之一,其濃度的變化可反映骨代謝的狀態(tài)。因此,通過檢測小鼠血清或血漿中的PINP濃度,可評估小鼠的骨代謝狀況,為骨質疏松、骨折等疾病的診斷、治療和預防提供重要依據(jù)。

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