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ELISA檢測結果不理想的原因?

更新時間:2024-08-02    點擊次數(shù):1272

  ELISA檢測結果不理想的原因?

ELISA作為經典的免疫檢測方法,看起來很平常,然而真正做好它并不容易。BUNSEN本生專注科研試劑盒的研發(fā)及銷售多年,涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領域,滿足您實驗所需,以實現(xiàn)與客戶的雙贏,完善的庫存及供應體系以及高效穩(wěn)定的專業(yè)技術,保證產品均能現(xiàn)貨供應。有哪些方法可以借鑒呢?恒遠技術人員總結了以下幾點:

一、確定您的樣本類型和試劑盒可以兼容

常見樣本類型有血清,血漿,細胞培養(yǎng)上清,如果是廠家實驗驗證過的,可根據(jù)產品說明購買使用。

注意:血漿制備用到的抗凝劑有 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等多種,相應的血漿性質存在差異,需單獨確認兼容性

二、試劑盒檢測范圍需要匹配樣本中標志物濃度

elisa試劑盒的定量檢測范圍需參考標準曲線,在標準曲線低和最高濃度區(qū)間內屬于線性范圍,其中的值是可信和可定量的。濃度高于線性范圍的樣品要稀釋到線性范圍內來測量,而濃度低于線性范圍的樣品,其測量值不能用于計算濃度,只能用做參考。有一種常見的相關情況是:健康人樣本中很多標志物的濃度偏低,測量值低于標準曲線低值。

三、樣本收集有講究

以血清為例,樣本收集可參考試劑盒說明書,但需注意以下要點。樣本盡量用無菌管收集,避免細菌的酶類和代謝產品對結果的影響。采集過程要避免溶血,因為紅細胞溶解釋放的活性物質可能會影響檢測。保存過程中如有沉淀,應離心后取上清液。樣本若不立即測定,建議按照每次使用量分裝保存在 -20℃,每次檢測使用一管,即避免交叉污染和反復凍融,有能保證檢測結果的平行可比性。

四、實驗前要準備好相應試劑

提前將所有試劑平衡到室溫環(huán)境,這個過程大致需半小時左右。洗液是濃縮液,如有結晶析出,需溶解后再進行稀釋。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液。為保證蛋白標準品溶液配制質量,蛋白標準品為凍干粉,重溶前需將管子離心,加入說明書的緩沖液,慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻,至少 15 分鐘,不建議用槍頭吹打。溶解后如需保存,按每次使用量分裝后根據(jù)說明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標準品時,建議用聚丙烯管(對蛋白吸附力很低),每步都要充分混勻且更換新槍頭,確保梯度準確性。

五、儀器設備的準備

相關設備包括移液器、洗板機/搖床和酶標儀。移液器的準確性對于ELISA實驗結果的可靠性十分關鍵,需要確保定期校準維護。搖床的使用是為了讓反應體系快速達到平衡,獲得穩(wěn)定、可重復的結果。不用搖床對實驗通常的影響是,OD 值低,CV 大。酶標儀等設備使用前提前15分鐘開機預熱。

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